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细胞污染挽救(细胞被污染了怎么办)

发布时间:2023-05-15 10:24:28 阅读:13962次 来源:百度学术

  对于贴壁生长的细胞,相对来说比较简单但也很麻烦。以下我主要讨论贴壁生长的细胞。

  在讨论之前,大家首先要有一个概念,即洁净区,并不是没有细菌,而是细菌的数量非常少,国家标准100级的洁净标准是浮游菌数不得超过5个每立方米,沉降菌数不得超过1个每培养皿.而国外的标准比我国的还要高一点,要求的数量更少。

  所以在我们的洁净操作台里,并不是真正一个细菌都没有的,所以在操作的时候还是要尽量利索迅速地完成操作。尽量减少进入培养体系细菌的数量。

  所以处理细菌污染的重要原则就是:无限地稀释细菌的浓度,无限地减少细菌的数量!

  1)将污染的培养液倒掉,转烧瓶口,加入10mlPBS,适当晃动清洗培养瓶,然后倒掉。转烧瓶口。

  2)继续加入10mlPBS,同样方法晃动,清洗培养瓶,然后倒掉。

  3)继续加入5mlPBS,同样方法洗瓶,主要是培养面,然后倒掉。

  4)重复步骤3再洗。

  5)重复步骤3再洗。

  6)加入3-5ml双抗,洗瓶,静置3-5分钟,然后吸出。

  7)加入3ml双抗,洗瓶,静置3-5分钟,然后吸出。

  8)再加入5mlPBS洗瓶,然后吸出。

  9)加入10ml培养液,加入2ml双抗,放置培养箱培养,5小时之后,倒掉培养基,加入PBS洗瓶两次,然后加入胰酶消化,吹打后置于离心机800-1000r/min离心,然后洗一次。置于新的培养瓶里培养,培养体系加入2ml双抗。

  10)24h之后,视情况换液,若仍然污染严重,培养基浑浊,重复以上步骤,若看不到污染物,则继续步骤1) 3) 4) 6) 8),然后加入培养液培养,培养体系加入2ml双抗.

  11)24h之后,若仍污染严重,可再重复一次,若还污染只能弃之(不过一般没有出现这种情况),若镜下不见污染物,则换液PBS洗瓶,正常培养。

  以上方法主要是针对贴壁生长的细胞,在操作的过程中,一定要小心操作动作,轻柔缓慢,切忌大动作鲁莽。防止细胞脱落。以上方法操作得当,基本上都能救活你的细胞。当然如果你的细胞仍有富余或者冻存的,我还是建议你把污染的扔掉,再复苏方便省事。


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