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细菌污有哪几类污染,污染类型有什么区别

2023-04-02 10:34:51
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  污染向来是在细胞培养中的大问题。预防或治理污染是细胞培养成功的关键因素。我们在细胞培养时,在开始阶段就要十分重视污染问题,否则会功尽弃,这样不仅浪费时间,也会浪费人力、物力。

     (一)  有哪几类污染?

  在细胞培养过程中的污染不只是指微生物,而且还包括所有混入培养环境中的、对细胞生存有害或造成细胞不纯的物质,包括生物和化学物质。

  1、细菌污染

  细菌污染是实验室细胞培养中常见的污染,即使在细胞培养液中加入了抗菌素,也可能因为操作不慎而引起污染。见的有革兰氏阳性菌,如枯草杆菌以及大肠杆菌、假单胞菌等革兰氏阴性菌,其中又以白色葡萄球菌较常见。培养细胞受细菌污染后,会出现培养液变混浊,pH改变。污染后细胞发生病理改变,胞内颗粒增多、增粗,后变圆脱落死亡。

  2、真菌污染

  真菌污染是细胞培养过程中见的一种,的真菌有烟曲霉、黑曲菌、孔子霉、毛霉菌、白色念珠菌和酵母菌。培养细胞受真菌污染后,可见培养液中漂浮着白色或浅黄色的小点,有的散在生长,培养液一般不发生混浊;倒置显微镜下可见丝状、管状或树枝状的菌丝纵横交错在细胞之间或培养基中,有的呈链状排列。真菌污染后,细胞生长变慢,但后由于营养耗尽及毒性作用而使细胞脱落死亡。

  3、支原体污染

  支原体是介于细菌与病毒之间能独立生活的小微生物,小直径0.2μm,一般过滤除菌无法去除它,光镜下难以看清它的形态结构。开始不易发现,能在偏碱条件下生存,对青霉素有抗药性。多吸附于细胞表面或散在于细胞之间。  培养细胞受支原体污染后,部分敏感细胞可见细胞生长增殖变慢,部分细胞变圆,从瓶壁脱落。但多数细胞污染后无明显变化,或略有变化,若不及时处理,还会产生交叉污染。

  4、非同种细胞污染

  由于细胞培养操作时各细胞株所需的器材和溶液没有严格分开,往往会使一种细胞被另一种细胞污染。目,上已有几十种细胞都被HeLa细胞所污染,致使许多实验宣告无效。   细胞培养物所造成的化学成分的污染也偶有发生,大多是由于细胞培养所需物品清洗消毒不*而带入一些有毒化学物质所致。

     (二)污染类型的区别

  1、细菌、真菌污染的检测

  (1)  肉眼观察 ---- 细菌、真菌污染常在传代、换液、加样等开放性操作之后发生,而且增生迅速,若有污染,在48小时内可明显观察到,例如培养液变混浊,或略加振荡有很多漂浮物漂起。

  (2)  接种观察 ---- 用普通肉汤接种或用未加双抗药物的培养液接种,也可发现是否有污染。

  (3)  镜下观察 ---- 倒置显微镜的高倍镜下可见培养液中有大量圆球状颗粒漂浮,即为细菌污染。细胞之间有丝状、管状、树枝状或卵形的物质常为真菌污染。

  2、支原体污染的检测

  (1)  相差显微镜观察 ---- 接取少许培养液滴在载物片上,再盖上盖片观察,支原体在镜下呈暗色微小颗粒,多位于细胞与细胞之间,有时可见类似于布朗运动的表现。注意与细胞破碎溢出的内容物如线粒体等相区别。

  (2)  荧光染色法观察 ---- 荧光染料Hoechst33258,此染料能与DNA特异地结合,可使支原体内的DNA着色,荧光显微镜下支原体呈绿色小点,散在于细胞周围或附于细胞表面。

  (3)  电镜检测 ---- 条件许可,可用扫描电镜或透射电镜观察。一般在细胞培养48~72小时,细胞接近汇合,用胰酶消化细胞制成细胞悬液后进行固定、包埋、切片后才能进行观察。

  (4)  培养检测 ---- 细胞悬液5mL加入45mL支原体肉汤培养基,培养14天后观察肉汤培养有无雾状沉淀,然后取0.5ml加入已冷却到50℃的培养基中,再用琼脂培养基做分离培养,37℃培养3天观察有无“荷包蛋"菌落出现。

     (三)病毒的检测

  (1)  应用电镜技术快速诊断动物病毒病

  (2)  逆转录_聚合酶链反应RT_PCR检测病毒

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