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细胞复苏需要用到哪些细胞培养耗材

2023-03-19 10:26:55
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  细胞复苏是与相反的过程,即是细胞恢复生长的过程,是将冻存在液氮或者-70℃冰箱中的细胞解冻之后重新培养。那么细胞复苏需要用到哪些细胞培养耗材,其步骤又是怎样的呢?

  细胞复苏与细胞冻存不同,其过程升温要快,防止在解冻过程中水分进入细胞,形成冰晶,影响细胞存活。需要用到的细胞培养耗材包括培养瓶、吸头、冻存管、离心管、移液管等,复苏步骤如下:

  ①将冷冻管从液氮中取出,迅速投入37℃水浴融化,融化后要尽快(约1min)移出37℃水浴。37℃水浴时间延长会提高细胞死亡率,复苏过程中一般细胞死亡率在20%~25%之间。

  ②迅速用擦拭冷冻管外部杀菌消毒,然后放置在冰浴上。

  ③小心开启瓶盖,把细胞转入含有4mL培养基的培养瓶中,然后把培养瓶移至培养箱,36℃~38℃培养1h,让细胞贴壁。

  ④细胞贴壁后,小心移弃培养基,主要是去掉DMSO(悬浮生长细胞要通过离心沉淀除去DMSO)、死细胞及其碎片,加5mL新鲜培养基,36℃~38℃培养。

  ⑤24h后,更换新鲜培养基,继续培养直到形成单层,便可以传代。

  ⑥详细记录复苏细胞的名称、数量、复苏时间、存放部位等。

  细胞复苏时要注意无菌操作,所用到的细胞培养耗材需经过灭菌处理,操作人员注意个人卫生,避免污染细胞,影响细胞培养进程。

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