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细胞侵袭实验相关介绍

2022-10-13 10:42:09
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  肿瘤细胞通过膜表面特定受体与基质或基底膜的层粘连蛋白、纤维连接蛋白和IV型胶原等相粘连,然后肿瘤细胞可释放蛋白水解酶或激活基质中已存在的酶原,使基质成分降解,最后肿瘤细胞运动而充填到被水解了的基质的空隙处,如此三个过程不断重复肿瘤细胞不断向深层侵袭。

  【应用简介】

  肿瘤细胞通过膜表面特定受体与基质或基底膜的层粘连蛋白、纤维连接蛋白和IV型胶原等相粘连,然后肿瘤细胞可释放蛋白水解酶或激活基质中已存在的酶原,使基质成分降解,最后肿瘤细胞运动而充填到被水解了的基质的空隙处,如此三个过程不断重复肿瘤细胞不断向深层侵袭。

  【技术原理】

  本实验采用的Matrigel是从小鼠EHS肉瘤中提取的基质成分,含有LN、IV型胶原等。将Matrigel铺在Transwell侵袭小室的多孔滤膜上,能形成与天然基底膜极为相似的基底膜结构。具有侵袭能力的细胞在趋化剂诱导下可穿过多孔滤膜,侵袭细胞经染色后,在显微镜下观察和计数。

  【实验方法】

  Step1:制备条件培养基

  Step2:包被基底膜

  Step3:水化基底膜

  Step4:接种细胞

  Step5:培养细胞

  Step6:固定及染色

  Step7:镜检

  技术总结

  1、24孔板下室一般加入600ul的培养基,特别注意的是,下层培养液和小室间常会有气泡产生,一旦产生气泡,下层培养液的趋化作用就减弱甚至消失了,在种板的时候要特别留心,一旦出现气泡, 要将小空提起,去除气泡,再将小室放进培养板;

  2、接种的细胞应选择处于对数生长期且状态良好,细胞计数需准确;

  3、待细胞迁出,且形态展开后即可固定染色;

  4、染色后,可用棉签轻轻擦掉上层未迁出细胞;

  5、拍照时,同一视野不可重复拍照,膜上小孔清晰,细胞形态明显,所有照片的背景需统一。

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