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细胞株转染时的瞬转和稳转区别是什么?

发布时间:2022-09-23 10:33:15 阅读:120862次 来源:百度学术

  细胞株的转染是将外源性基因导入细胞内的一种专门技能。随着基因与蛋白功用研讨的深化,转染目前已成为试验室工作中常常涉及的根本办法。转染大致可分为物理介导、化学介导和生物介导三类途径。电穿孔法、显微打针和基因枪归于通过物理办法将基因导入细胞的范例;化学介导办法许多,如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染办法、和多种阳离子物质介导的技能;生物介导办法,有较为原始的原生质体转染,和现在比较多见的各种病毒介导的转染技能。

  细胞株转染时的瞬转和稳转区别是什么?

  瞬转即瞬时转染,是指将外源质粒通过某种方式导入到细胞内得以表达;

  稳转即病毒感染,是利用慢病毒将外源插入整合到宿主细胞的基因组,从而达到持久性表达。

  由此可见,二者的区别即:

  稳转是基因组整合到宿主细胞基因组,跟随细胞一起增值得以稳定遗传;

  瞬转是质粒游离在细胞内,一个宿主细胞中可存在多个拷贝数,产生高水平的表达,但通常只持续几天,但不能稳定遗传。

  细胞株进行转染时转染试剂的准备:

  1.将400ul去核酸酶水参加管中,震动10秒钟,溶解脂状物。

  2.震动后将试剂放在-20℃保存,使用前还需震动。

  3.挑选适宜的混合比例(1:1-1:2/脂质体体积:DNA质量)来转染细胞。在一个转染管中参加适宜体积的无血清培育基。

  4.将混合液在室温放置10-15分钟。

  5.吸去培育板中的培育基,用PBS或者无血清培育基清洗一次。

  6.加混合液,将细胞放回培育箱中培育一个小时。

  7.到时后,依据细胞品种决议是否移除混合液,之后参加彻底培育基持续培育24-48小时。


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