细胞划痕实验是一种非常简单的检测细胞运动的方法，本文主要介绍细胞划痕实验的步骤方法和相关技巧。

　　细胞划痕实验步骤：

　　1.实验材料：细胞样品、直尺、marker笔、6孔板、显微镜、酒精灯、移液枪、CO2培养箱等；PBS等。

　　2.实验准备阶段：将所有实验器械进行灭菌处理，将直尺和marker笔放超净台内，用紫外照射30min

　　3.实验操作：

　　a) 用marker笔和直尺在6孔板背后均匀的画横线，大约每隔0.5-1cm一道，横穿过孔，每孔至少穿过5条线。

　　b) 在孔中加入约5*105个细胞，具体数量因细胞不同而不同，掌握为过夜能铺满。

　　c) 第二天用枪头比着直尺，尽量垂至于背后的横线划痕，枪头要垂直，不能倾斜

　　d) 用PBS洗细胞3次，去处划下的细胞，加入无血清培养基。

　　e) 放入37℃，5%CO2培养箱，培养。通过显微镜拍照。

　　实验技巧总结：

　　1) 在用PBS缓冲液冲洗时，应当贴壁匀速缓慢加入，这样做的目的是避免单层贴壁细胞被冲散，影响划痕实验拍照结果

　　2) 推荐使用6孔板铺细胞，因为6空板可以保证有相当距离的平直划痕，而且因为有5条定位线，与划痕相交，这样就有10个可固定监测点，不作重复，误差也很小。

　　3) 划痕实验应当选择无血清或者低血清（＜2%）否则细胞增殖就不能忽略。

　　4) 实验时应注意细胞生长状况，选择适当的细胞接种浓度。对不同的细胞要观察细胞的贴壁率等，确定实验时细胞的接种数量和培养时间，保证培养终止时密度适当。

　　5) 如果你连续监测24小时，你需要考虑到划痕缩小是细胞迁移和细胞繁殖共同作用的结果，而不是单纯的细胞迁移。如果你要单纯的考虑细胞迁移，你可以先用丝裂霉素（1 μg/ml）处理一小时，抑制细胞的分裂，这样你的结果就是细胞迁移的作用了。另外，使用无血清培养基也可以降低增殖对实验结果的影响。

　　6) 照片拍完之后，可以用imageJ 来测量划痕区域的像素定量比较细胞迁移的速度。

　　7) 虽然无血清培养可以忽略细胞增殖的影响，但是由于细胞内信号传导系统整体性的下调节，细胞迁移的速度也会慢很多。