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细胞划痕实验步骤(附带实验技巧总结)

发布时间:2022-09-05 10:29:38 阅读:14632次 来源:百度学术

  细胞划痕实验是一种非常简单的检测细胞运动的方法,本文主要介绍细胞划痕实验的步骤方法和相关技巧。

  细胞划痕实验步骤:

  1.实验材料:细胞样品、直尺、marker笔、6孔板、显微镜、酒精灯、移液枪、CO2培养箱等;PBS等。

  2.实验准备阶段:将所有实验器械进行灭菌处理,将直尺和marker笔放超净台内,用紫外照射30min

  3.实验操作:

  a) 用marker笔和直尺在6孔板背后均匀的画横线,大约每隔0.5-1cm一道,横穿过孔,每孔至少穿过5条线。

  b) 在孔中加入约5*105个细胞,具体数量因细胞不同而不同,掌握为过夜能铺满。

  c) 第二天用枪头比着直尺,尽量垂至于背后的横线划痕,枪头要垂直,不能倾斜

  d) 用PBS洗细胞3次,去处划下的细胞,加入无血清培养基。

  e) 放入37℃,5%CO2培养箱,培养。通过显微镜拍照。

  实验技巧总结:

  1) 在用PBS缓冲液冲洗时,应当贴壁匀速缓慢加入,这样做的目的是避免单层贴壁细胞被冲散,影响划痕实验拍照结果

  2) 推荐使用6孔板铺细胞,因为6空板可以保证有相当距离的平直划痕,而且因为有5条定位线,与划痕相交,这样就有10个可固定监测点,不作重复,误差也很小。

  3) 划痕实验应当选择无血清或者低血清(<2%)否则细胞增殖就不能忽略。

  4) 实验时应注意细胞生长状况,选择适当的细胞接种浓度。对不同的细胞要观察细胞的贴壁率等,确定实验时细胞的接种数量和培养时间,保证培养终止时密度适当。

  5) 如果你连续监测24小时,你需要考虑到划痕缩小是细胞迁移和细胞繁殖共同作用的结果,而不是单纯的细胞迁移。如果你要单纯的考虑细胞迁移,你可以先用丝裂霉素(1 μg/ml)处理一小时,抑制细胞的分裂,这样你的结果就是细胞迁移的作用了。另外,使用无血清培养基也可以降低增殖对实验结果的影响。

  6) 照片拍完之后,可以用imageJ 来测量划痕区域的像素定量比较细胞迁移的速度。

  7) 虽然无血清培养可以忽略细胞增殖的影响,但是由于细胞内信号传导系统整体性的下调节,细胞迁移的速度也会慢很多。

本文链接:https://www.zjby-biotech.com/news/hyzx/1554.html

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