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细胞培养的原理和实验步骤

发布时间:2022-09-02 10:49:24 阅读:12042次 来源:百度学术

  细胞培养:体外模拟体内需要的生长条件(温度,营养等),然后加上一些处理条件,比如做药物筛选,就可以做抗性基因的表达的筛选,比如还可以测定某个基因敲低或是过表达的产物,这个当然要结合WB来看最后基因的表达产物是否升高哦,细胞培养的应用还有很多,欢迎大家在后台留言。

  细胞培养的基本原理:细胞传代(生存空间和营养不足,长得太密,代谢废物太多,要洗洗,同时也要分离出一部分细胞,要加入新的培养液),换液(生存空间和营养剩余,但是代谢废物太多,要洗洗,要吃饭,才能长好,所以要洗和加入新鲜培养基),冻存(太多了,先存起来,液氮里面里就是低温,保存能量,活得久),复苏(解冻,恢复吃饭的能力,恢复生长。)这四步。

  细胞培养的基本步骤(一定要明白每个步骤的意义和目的):

  01细胞传代(贴壁细胞):

  试剂:PBS,胰酶,含血清的培养基;

  流程:显微镜下看一看培养皿里的细胞多不多,太多(80%~90%)会导致代谢废物很多,先吸掉废液,再用PBS洗一洗,同时太多会导致细胞黏在一起,这时候就需要加点胰酶消除它们之间的粘性,是否消除完,在显微镜下看一看,看完加入适宜的含血清的培养基,中和一下胰酶,这叫吹打,除此之外,细胞太多了,把一部分细胞移出来,加入适量的培养基放入孵箱继续培养,这叫传代。

  02细胞换液:

  试剂:PBS,含血清的培养基;

  流程:先吸掉代谢废物(即细胞瓶中的培养液),再用PBS洗一洗,由于细胞长得不是很多,细胞之间没有黏在一起,因此不需要加入胰酶来消除它们之间的粘性。由于细胞要吃饭,加入新鲜的含血清的培养基,最后放到孵箱里面进行培养。

  03细胞冻存:

  试剂:冻存液,PBS,胰酶,含血清的培养基;

  流程:要冻存,先配置冻存液,冻存液包含了:DMSO:防止在低温(零度以下至-196℃)保存细胞时,细胞内液会形成冰晶,渗透压会发生改变,细胞结构会出现紊乱,会导致细胞出现损伤。冻存液制备时,一般需与血清一起配置:因为两者互融时,会散发热量,所以冻存液需提前制备。

  因为细胞太多了,需要冻存,所以要先看一看,吸一吸,洗一洗,分一分,中和一下,吹打制成细胞悬液,离心,吸掉上清液,加入冻存液,轻轻吹吸均匀,每管等量1ml装入冻存管,4℃20min,-20℃30min,-80℃过夜,最后放入液氮罐。

  04细胞复苏:

  试剂:含血清的培养基;

  流程:从液氮中取出冻存管,迅速(小于3min)置于37℃水浴锅中,解冻时,边晃动边观察,当看到只有一小块冰存在时,即可从水浴锅中取出,打开冻存管,迅速将细胞悬液吸到离心管中,轻轻混匀,1000r/min,离心五分钟,吸掉上清液,沉淀中加入适量培养液,放入孵箱中,培养。还有就是:复苏的细胞,需要在24小时后,换一次培养液。


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