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PCR实验怎么预防核酸气溶胶污染

发布时间:2022-08-03 10:39:04 阅读:1222次 来源:百度学术

  PCR实验,即临床基因扩增实验,是专门用来检验艾滋病、乙型肝炎、禽疫病等病毒感染性疾病的一种检测手段。它可以通过将病毒体内所含的基因进行扩增的方法,测出一些病毒含量不高的感染者体内是否含有特定的病毒。

  疫情以来核酸检测都是通过PCR实验方法检测新冠,核酸检验人都知道在核酸检测实验室内样本的制备、扩增过程中都会产生各种污染,比如样本交叉污染、试剂仪器交叉污染、克隆质粒污染、PCR扩增产物污染、还有极容易忽视的气溶胶污染,气溶胶是由固体或液体小质点分散并悬浮在气体介质中形成的胶体分散体系,在空气与液体面摩擦时,比如在核酸提取制备模板时,反复吹吸/混匀震荡反应液,以及PCR体系配液时充分震荡反应管,开盖时、吸样时及污染进样枪的反复吸样都可形成气溶胶而污染。

  DNA/RNA气溶胶污染的问题,很严重,广泛分布在样本容器、实验室台面,试剂溶液中、仪器表面、内管附着等等,极其微量的气溶胶污染即可造成假阳性的结果,进而可能引起整个PCR实验室的污染,严重的甚至要关闭实验室,严重影响实验工作,甚至耽误疫情防控工作的开展。

  如何预防核酸气溶胶污染:

  1、建设要求。PCR实验室的建设需要设置标准的“四区”:试剂准备区、标本制备区、PCR扩增检测区和扩增产物检测区。每个独立实验区设置有缓冲区,各区通过气压调节,使整个PCR实验过程中试剂和标本免受气溶胶的污染,并降低扩增产物对人员和环境的污染。

  2、人员要求。进入PCR实验室,需要经过从基础理论、实验原理、规范操作、质量保证到注意事项等规范的培训,并获取PCR上岗证。

  3、检测风险。检测过程中,样本的开盖,核酸提取的震荡、离心都有可能产生气溶胶,有感染的风险。

  4、防护要求。必须按照生物安全三级实验室的个人防护要求进行。

  PCR实验室的环境消毒:

  临床基因扩增检验实验室的环境清洁:《临床基因扩增实验室工作规范》中有对物表清洁、消毒的要求,不同的实验区域应当有其各自的清洁用具以防止交叉污染。

  (1)基本原则:由清洁区向污染区进行,洁具不可交叉。

  (2)清洁消毒方向:准备区→标本制备区→扩增区→产物检测区。

  (3)清洁消毒范围:工作区域的物体表面(含桌、椅),可使用含氯消毒剂擦拭消毒,空气和工作台面可使用紫外线照射消毒,也可使用空间消毒器进行全环节消毒。不可使用紫外线消毒器及化学消毒进行有人状态下的消毒。PCR室内的消毒应防止扬尘(减少人员走动)、杀灭DNA或RNA的基因片段。可选择悬挂紫外线灯管进行空气消毒,试验前照射30-60分钟,实验结束照射30-60分钟,必要时延长照射时间(可照射一夜)。

  (4)终末消毒:当出现实验室污染时,应按要求立即撤出相关人员,在无人情况下可使用化学消毒剂进行终末消毒,如熏蒸法:过氧乙酸1g/ m加热熏蒸(湿度70-90%),密闭24小时;气溶胶喷雾:3%过氧化氢:20mL/m气溶胶喷雾;5%过氧乙酸2.5mL/m气溶胶喷雾(湿度20-40%)。

本文链接:https://www.zjby-biotech.com/news/hyzx/1437.html

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