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做细胞复苏实验有什么注意事项

2022-07-30 10:34:58
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  细胞复苏和冻存讲究“慢冻快溶”,复苏时一定要将冻存在液氮或-80℃中凝固的细胞冻存液快速融化至37℃,使胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。

  细胞复苏注意事项

  复苏时动作要快,尽量减少胞内形成冰晶,影响复苏后细胞活率。

   融化时尽量不要碰到管口,以免容易造成污染。

  若一次性需要复苏细胞很多,可以分批水浴解冻,防止传热不佳使得细胞融化时间延长。

  若需要同时复苏好几种细胞,提前在离心管和培养瓶上做好标记,或记住自己摆放的位置,不要弄混乱。

  何判定细胞是否发生支原体污染:可以选用直接培养法、荧光染色或PCR方法检测,比较常用的是PCR。当细胞发生支原体污染时,原则上是能够去除支原体的,但是整个过程耗时耗力,还要考验个人操作能力。所以如果不是处于细胞存量很少的情况下,建议发现污染时立刻弃掉,重新培养。

  如果孵箱中只是某种细胞持续性大量死亡,而其他细胞状态都没问题的话,基本上可以确定就是孵箱存在特异性感染这类细胞的真菌或细菌,遇到这种情况,小六儿也不知道该怎么做,只能是先停一段时间看看。

  其他注意事项:每个星期都要更换孵箱底盘中的水(紫外照射后超纯水);每两周消毒一次孵箱:75%酒精擦拭一遍后,再用0.1%新洁尔灭擦拭一遍(都用超纯水配制);可以在孵箱底部放一个烧杯,里面放入饱和硫酸铜,可以抑制霉菌生长。不过也有人说硫酸铜会改变孵箱的PH值,如果不是孵箱污染的情况很严重,建议不要使用。


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