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DAB染色液的使用方法及注意事项

2022-07-06 10:41:37
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  DAB染色液用于免疫组化染色,应用在Dako 自动染色系统上。

  一、DAB染色液的使用方法

  ⒈DAB显色液配制

  10mM Tris-HCl (pH7.6) 9mL +DAB (diaminobezidin 3,3-二氨基联苯胺) +0.3%(W/V) NiCl2 或CoCl2 1mL ,显色时加入5-10mL 30%H2O2 混匀后立即使用

  ⒉显色

  准备好含有待测蛋白的固相膜:包括电泳、转印、封阻、一抗(或生物素)处理、辣根过氧化酶(HRP)标记的二抗(或链霉亲和素)处理、清洗等步骤。

  ⒊加入适量的DAB显色液,铺满整个固相膜表面(可按比例增减)。

  ⒋置于平式摇荡仪上,在室温下孵育2至5分 钟,避免光照(暗室操作),直至棕褐色沉淀出现。

  ⒌用镊子夹起固相膜,放进无离子水里清洗。

  ⒍空气中晾干。

  ⒎拍照记录 。

  二、DAB染色液的注意事项

  ⒈DAB溶液应低温密封保存。如有结晶析出,应确保结晶完全溶解再行使用;

  ⒉显色工作液应现用现配,新鲜配制的工作液应为无色或浅棕色,如颜色过深,请勿使用;

  ⒊DAB在常温下不稳定,每次取用后均应及时加盖密封放回冰箱,以免因DAB分解影响实验,或因渗漏造成实验环境污染;

  ⒋DAB有潜在致突变作用,操作时应注意穿戴好防护用具。


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