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新手怎么做好细胞培养实验,细胞培养的基本条件有哪些

发布时间:2022-06-22 10:17:37 阅读:1722次 来源:百奥益康

  细胞培养是指在体外模拟体内环境(无菌、温度、酸碱度和一定营养条件等),使之生存、生长、繁殖并维持主要结构和功能的一种方法,也叫细胞克隆技术。细胞培养技术是细胞生物学研究方法中非常重要且常用的技术,通过细胞培养既可以获得大量细胞,又可以借此研究细胞的信号转导、细胞的合成代谢、细胞的生长增殖等。

  准备工作

  准备工作对开展细胞培养异常重要,工作量也较大,应给予足够的重视,准备工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或无法进行。准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒,培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌,无菌室或超净台的清洁与消毒,培养箱及其他仪器的检查与调试。

  取材

  在无菌环境下从机体取出某种组织细胞,经过一定的处理后接入培养器皿中,这一过程称为取材。机体取出的组织细胞的首次培养称为原代培养。理论上讲各种动物和人体内的所有组织都可以用于培养,实际上幼体组织比成年个体的组织容易培养,分化程度低的组织比分化高的容易培养,肿瘤组织比正常组织容易培养。取材后应立即处理,尽快培养,因故不能马上培养时,可将组织块切成黄豆般大的小块,置4℃的培养液中保存。取组织时应严格保持无菌,同时也要避免接触其他的有害物质。取病理组织和皮肤及消化道上皮细胞时容易带菌,为减少污染可用抗菌素处理。

  培养

  将取得的组织细胞接入培养瓶或培养板中的过程称为培养。细胞进入培养器皿后,立即放入培养箱中,使细胞尽早进入生长状态。正在培养中的细胞应每隔一定时间观察一次,观察的内容包括细胞是否生长良好,形态是否正常,有无污染,培养基的PH是否太酸或太碱,此外对培养温度和CO2浓度也要定时检查。一般原代培养进入培养后有一段潜伏期,在潜伏期细胞一般不分裂,但可贴壁和游走。过了潜伏期后细胞进入旺盛的分裂生长期。细胞长满瓶底后要进行传代培养,将一瓶中的细胞消化悬浮后分至两到三瓶继续培养。每传代一次称为“一代”。二倍体细胞一般只能传几十代,而转化细胞系或细胞株则可无限地传代下去。转化细胞可能具有恶性性质,也可能仅有不死性而无恶性。培养正在生长中的细胞是进行各种生物医学实验的良好材料。

图例

  冻存及复苏

  为了保存细胞,特别是不易获得的突变型细胞或细胞株,要将细胞冻存。冻存的温度一般用液氮的温度-196℃,将细胞收集至冻存管中加入含保护剂的培养基,以一定的冷却速度冻存,最终保存于液氮中。在极低的温度下,细胞保存的时间几乎是无限的。复苏一般采用快融方法,即从液氮中取出冻存管后,立即放入37℃水中,使之在一分钟内迅速融解。然后将细胞转入培养器皿中进行培养。冻存过程中保护剂的选用、细胞密度、降温速度及复苏时温度、融化速度等都对细胞活力有影响。

  细胞培养的基本条件

  1. 无污染的细胞培养环境

  确保在无毒无菌环境下进行试验,在体外培养的细胞缺少对微生物和毒物的防御能力,一旦被微生物或有毒有害物质污染,或自身代谢物质积累,可导致细胞中毒死亡。

  2. 恒定的温度

  想要维持培养细胞体外生存,必须有恒定的适宜温度。人和哺乳动物的细胞培养的适宜温度为36.5℃±5℃,偏离这一范围会使细胞正常代谢受到影响甚至死亡。

  3. 气体环境

  气体是体外培养细胞生存的必须条件,所需要的气体主要有氧气和二氧化碳。

  4. PH条件

  大多数细胞适宜的PH为7.0-7.4,偏离这一范围对细胞培养将产生有害的影响。各类细胞对PH的要求也不完全相同,原代细胞对PH波动较为敏感,耐受性较差。

  5. 渗透压

  人血浆渗透压约为290mmol/L,可视为培养细胞理想渗透压。对大多数细胞来说渗透压在260-320mmol/L范围较合适。

  6. 水质

  水是细胞中含量最高的物质,是维持细胞生命活动不可获取的物质。体外培养的细胞对水的质量非常敏感,培养要求用液必须使用三蒸水或去离子水配置。

  7. 细胞培养基

  培养基是体外培养细胞中补给细胞营养和促使细胞生长繁殖的基础物质,也是体外培养细胞生长和繁殖的中生存条件。

  周佳玉  | 文案

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