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细胞HE染色实验原理和流程

发布时间:2022-06-19 10:26:43 阅读:116992次 来源:百度学术

  HE染色基本原理

  细胞核染色原理

  苏木精为碱性天然染料,可使细胞核着色。细胞核内染色质的成分主要是DNA,在DNA的双螺旋结构中,两条核苷酸链上的磷酸基向外,使DNA双螺旋的外侧带负电荷,呈酸性,很容易与带正电荷的苏木精碱性燃料以离子键或氢键结合而被染色。苏木精在碱性溶液中呈蓝色,所以细胞核被染成蓝色。

  细胞浆染色原理

  细胞浆内主要成分是蛋白质,为两性化合物、细胞浆的染色与pH值有密切关系,当pH调到蛋白质等电点4.7-5.0时,胞浆对外不显电性,此时酸或碱性染料不易染色。当pH调到6.7一6.8时,大于蛋白质的等电点pH值,表现酸性电离,而带负电荷的阴离子,可被带正电荷的染料染色,现时胞核也被染色,核和胞浆难以区分。因此必须把pH调至胞浆等电点以下,在染液中加入醋酸使胞浆带正电荷(阳离子),就可被带负电荷(阴离子)的染料染色。伊红Y是一种化学合成的酸性染料,在水中离解成带负电荷的阴离子,与蛋白质的氨基正电荷(阳离子)结合而使细胞浆染色,细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织,嗜伊红颗料等被感染成不同程度的红色或粉红色,与蓝色的细胞核形成鲜明的对比。

  细胞HE染色流程

  细胞

  培养的细胞HE染色过程与组织切片的染色过程基本相同,包括样品制备、染细胞核、染细胞质、脱水、透明、封固和观察等步骤

  01、样品制备

  细胞:取细胞密度约为1×105/mL接种于含盖玻片的培养瓶中,放入CO2培养箱中培养一段时间,待细胞基本长成单层,取出长有细胞的盖玻片,用PBS洗3次。

  02染细胞核

  a. 固定

  将盖玻片浸入95%乙醇固定15min,PBS洗2次,每次1min;

  浸入苏木精染液,染色5~10min。b. 分色

  自来水浸洗,浸入稀盐酸乙醇溶液进行分色,数秒钟即可;

  自来水浸洗,浸入淡氨水中,使胞核蓝化3~5min;

  自来水浸洗。

  03染细胞质

  a. 浸入伊红染液,染色5~10min;

  b. 自来水浸洗;

  04脱水

  逐级脱水:经70%、80%、90%乙醇各脱水1次,95%乙醇脱水2次,百分百的乙醇脱水3次,每次1min。

  04透明

  二甲苯透明3次,每次1min。

  04封固

  在载玻片上滴加中性树胶,将有细胞一面的盖玻片向下封固于载玻片上。

  04观察

  光镜下观察,细胞质呈粉红色,细胞核呈蓝紫色。

  注意事项

  细胞

  1.染色时调节pH值很重要。如果组织块在福尔马林中固定时间长,组织酸化而影响细胞核着色。因此,要在自来水中冲洗时间长一些或在饱和碳酸锂水溶液中处理10-30min,这样可以使细胞核着色较深。染伊红时胞浆着色不佳,可在伊红溶液中滴加1-2滴冰醋酸。

  2.切片染苏木精后,分色这一步是关键,应在显微镜下控制进行,一般以细胞核染色清楚(晰)而细胞质基本无色为佳。如果过分延长分色时间将导致染色太浅,应重新染色后再行分色。

  3.切片经酒精脱水后,入二甲苯时可出现白色不透明状态,此为脱水不彻底,应将切片退回无水酒精,更换酒精、二甲苯,以求彻底脱水与透明。

  4.在染色过程中不要让切片干燥,以免切片收缩、变形,影响神经元形态。

  5.切片从二甲苯取出或进入二甲苯前,切片周边均应擦干净或吸干多余水分。

  6.zui后封固时,要用中性树脂,防止日后褪色,盖片要选大于组织块的面积,如漏出一部分不久将会褪色,所用树脂浓度要适当,树脂封固时不能有气泡。

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