资讯动态

细胞培需要用到养用的液体

2022-05-30 10:14:46
|
访问量:114512

  一、细胞培养所需的培养液

  在细胞的研究和利用过程中,最主要的是要为细胞提供最适的生长条件,保持细胞培养开始时的群体状态。这就要求培养条件始终如一,近乎呆板地坚守细节和常规,而且细胞培养,试剂昂贵,费时、费力,不是随随便便就可以进行的。

  细胞只有在最适生长条件下,才会保持正常的核型及功能。如果培养条件上打折扣,就意味着会出现带有染色体重排或突变变异株细胞。某些营养成分或生长因子用量不足或细胞高密度培养时间过长,都不是最适生长条件。

  二、平衡盐溶液

  平衡盐溶液具有维持渗透压、调节酸碱平衡的作用,同时可以供给细胞生存所需的能量和无机离子成分。最常用于洗涤组织或细胞、配制培养用液的基础溶液是Hanks 溶液和磷酸缓冲盐溶液(简称PBS) 。

  三、血清

  血清中含有丰富的营养成分,包括多种生长因子及许多未知成分。动物细胞的生长都依赖血清。血清的种类很多,包括胎牛血清、小牛血清、马血清、兔血清、人血清等。

  选择一批最适于细胞的血清是很重要的,而且如有可能的话,应要求购买来源公司保留足量,以供应实验使用。这样可避免反复试用以选择最适血清所产生的费用。血清的质量可以通过检测细胞的克隆形成率来衡量。取对数生长期的细胞彻底消化后,以低密度(直径6mm 的平皿中加入约103个细胞)接种5~6 个平皿, 其中一个平皿中加入含30%血清的培养液,以测定高浓度血清的细胞毒作用。7~ 10d 后,出现肉眼可见的克隆时,倒掉培养液, 2%亚甲蓝染色2~5min,观察克隆形态、计算克隆形成率。克隆形成率一般为5%~ 10%。

  四、抗生素

  一般细胞培养时,抗生素不是必需添加成分。但一些特殊情况下培养液内需加入适量的抗生素, 如怀疑有污染、原代培养时、新手操作不够熟练。常用的抗生素有青霉素、链霉素、卡那霉素和庆大霉素。青霉素常用剂量为100U/ml , 链霉素常用剂量为100μg/ml。常配制成100 倍或200 倍, 分装为小包装, 于-20℃条件下保存。一次用一个小包装, 避免反复冻融 。

  五、特殊的添加因子

  特殊的添加因子可以使细胞培养的条件得到优化。原代培养细胞接种密度需适

  当提高,应尽可能用营养丰富的培养液,如使用胎牛血清。这些都属于一般优化条件。细胞培养条件优化的原则是:根据细胞类型, 模拟体内环境, 添加不同的细胞生长因子及有利于细胞生存、增殖的添加剂。表1 是常用的细胞培养添加成分。

  表 1 常用的细胞培养添加成分

生长因子类

其他因子

其他物质

表皮生长因子(EGF )

转铁蛋白

硒酸钠

血管内皮细胞生长因子(VEGF )

胰岛素

二巯基乙醇(2ME )

神经生长因子( NGF )

可的松

佛波酯

肝细胞生长/分散因子( HGF/SF )

肝素

霍乱霉素

肥大细胞/干细胞因子( M/SCF )


牛/兔脑提取物

神经肽类内皮因子(ET-1, ET-2, ET-3)


鸡胚提取物

碱性成纤维细胞生长因子( bFGF )



  一种细胞生长因子常常是多种细胞的丝裂原,如碱性FGF, 不仅是成纤维细胞的丝裂原,还是内皮细胞、角质细胞、黑素瘤细胞的丝裂原。EGF 可促进上皮细胞、成纤维细胞、胶质细胞及平滑肌细胞等多种细胞的增殖。

  培养干细胞时,常添加白血病抑制因子( leukemia inhibitory factor, LIF ) ,又称分化抑制因子( DIA ) , 是一种分泌型多肽,可抑制小鼠干细胞的自然分化。一般,可用纯化的LIF 直接加到培养液中,或使用用LIF 表达载体转染过的饲养层细胞。正常的STO 细胞也可分泌。STO 细胞还分泌其他一些促干细胞生长的因子。目前, 多数实验室仍使用饲养层细胞。重组的LIF 来源方便,与STO 细胞一起使用时,常用浓度为1000U/ml 。与小鼠胚胎成纤维细胞一起使用时, 常用浓度为500U/ml 。

  体外培养正常细胞需要使用不同生长因子的选择性组合。通常在已有的经典培养液配方基础上,添加不同因子而成。现在已有多种特定细胞培养液,且有商品供应,如血管内皮细胞培养液、神经干细胞培养液、骨髓干细胞培养液、间充质干细胞培养液、小鼠心肌细胞培养液(Claycomo Medium) 等。

  六、消化液

  细胞生长至一定密度时,需进行传代。消化液可使细胞脱离生长表面,离散成单个细胞。常用的消化液是0.25% 、0.125%的胰蛋白酶和0.02%的二乙胺四乙酸二钠(EDTA) 溶液,以无钙镁的PBS 或Hanks 溶液配制。它们可单独使用,也可按一定比例混合后使用。大部分细胞的消化可使用终浓度为0.05%胰蛋白/0.02%EDTA 混合液。有些上皮细胞贴壁力强,需较高浓度的胰蛋白酶(0.25% )或延长消化时间,甚至需要37°C温育。如果温育较长时间(超过20min)细胞仍不能脱壁,则应采取分步消化的措施,即将已脱壁细胞移出至离心管,加完全培养液中和胰蛋白酶的作用,对未脱壁的细胞再添加新胰蛋白酶再次消化。

  七、细胞培养用的其他液体

  细胞培养时,还会用到其他一些液体,如谷氨酰胺、HEPES 、丙酮酸钠、各种细胞生长因子、各种组织或细胞条件培养液,以及调整pH 使用的5.6%NaHCO3等。

  谷氨酰胺是细胞合成核酸和蛋白质必需的氨基酸,在缺少谷氨酰胺时,会导致细胞因生长不良而死亡。因此,各种培养液中都有较大量的谷氨酰胺。但是,由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定,故要适时添加。可配制200 倍液体-20℃ 冰箱中保存,在使用前加入培养液内,终浓度为2mmoVL 。

  HEPES 是一种非离子缓冲液,在pH 7.2~7.4 范围内具有较好的缓冲能力,在高浓度时对一些细胞可能有毒。HEPES 缓冲液可与低水平的碳酸钠( 0.34g/L)共用,以抵消因额外加入HEPES 引起的渗透压增加。安全浓度范围10~25mmol/L。丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源。一些生长缓慢的细胞加入,可明显改善细胞状态。通常配制200 倍液,-20℃ 冰箱保存,在使用前加入培养液内终浓度为1mmol/L。

  另外, 2-巯基乙醇(2-Mercaptoethanol, 2-Me) 对细胞生长有很重要的作用。有人认为它相当于胎牛血清, 有直接刺激细胞增殖作用。2-Me 的活性部分是硫氢基,其中一个重要作用是使血清中含硫的化合物还原成谷胱甘肽,能诱导细胞的增殖,为非特异性的激活作用。同时避免过氧化物对培养细胞的损害。另一个重要作用是促进分裂原的反应和DNA 合成,增加植物凝集素(PHA) 对淋巴细胞的转化作用,已广泛应用于杂交瘤技术。也开始用于一些难以培养的细胞。常用终浓度为5×10-5mol/L。常配制成0.1mol/L 的储存液,用时每升培养液加0.5ml 。

文章推荐
大鼠萎缩性胃炎动物模型造模方法(萎缩性胃炎动物研究)
2023-04-19
慢性萎缩性胃炎CAG是消化系统常见病、多发病之一,目前关于萎缩性胃炎···
细胞污染后的急救方法(细胞污染后怎么补救)
2023-04-03
细胞对一个实验来说至关重要,细胞培养失败,等于整个实验都白费了,···
香港大学研究揭巨噬细胞促进卵巢癌腹膜转移新机制
2022-05-19
据香港星岛网报道,卵巢癌患者的死亡率位列众多妇科癌症之首,原因是···
wnt通路细胞实验步骤详解,wnt通路细胞实验常用方法解析
2023-10-06
Wnt通路是一条广泛参与生物体发育和组织修复的信号通路。最近,研究人···
重大突破,IF12.1分!中科院亚热带所李凤娜团队在小鼠粪便中发现了预防结肠炎的有效物质!
2024-12-06
众所周知,我国肠炎发病率较高,通常是由感染、药物反应、食物不耐受···
组学都有哪些?这14种快速了解下!
2024-12-04
在生物医学领域中,有多个分支的组学,下面让我们一起来快速了解下以···
中科院1区IF10.6分!“外泌体+水凝胶”的国自然王炸组合,揭秘骨再生机制!不愧是顶刊思路,赶紧学习一波!
2024-12-02
众所周知,骨是人体重要的器官,承载着支撑运动,保护脏器等功能。在···
“铁积累+纤维化+细胞衰老”的王炸组合,不愧是Nature子刊的研究思路!轻松拿下中科院1区IF18.9分!
2024-11-29
“铁代谢”和“衰老”可以说是两个永不过时的研究热点,当然也是近几···
  • 业务咨询

    业务咨询专线:133 7682 0615

    Email:lxyjy@wie-biotech.com

在线留言(即刻联系为您提供专业的解决方案) ×
留言咨询

感谢您的关注,如有需要请留言,我们会尽快和您联系!