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AR42J细胞复苏有黑点怎么办(AR42J细胞培养注意事项)

2022-05-06 10:29:23
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  AR42J细胞基础信息

  1.培养条件

  培养液:Ham's F-12K(PM150910)+20% FBS(164210-500)+1% P/S(PB180120)

  培养环境:37℃、 5%二氧化碳、饱和湿度培养

  2.细胞背景

  AR42J(大鼠胰腺外分泌细胞)在肾上腺皮质激素刺激下可诱导出分泌活性,并伴有广泛的内质网重构。

  3.生长特性

  上皮细胞样,贴壁生长,生长速度缓慢,成片生长。

  AR42J细胞传代步骤

  01 吸出原培养液;

  02 加入2mL左右PBS,轻轻晃动培养瓶润洗细胞,吸出PBS丢弃;

  03 加入1mL左右胰酶,轻轻晃动培养瓶使之浸润所有细胞;

  04 放入培养箱消化,消化5分钟左右,显微镜下看到细胞块中间的细胞明显分离变圆且自然脱落;

  注:细胞一定要彻底消化下来,全程不要拍打培养瓶。

  05 加入3mL含血清的培养基终止消化,轻轻、反复吹打细胞,在显微镜下观察,细胞尽量呈单颗细胞的悬浮液

  06 收集细胞悬液离心,1200rpm离心3-5min,离心完吸出上清丢弃;

  07 加入新鲜培养基,吹打几下混匀细胞即可,按需接种到新培养瓶,补足足量培养基,拧松瓶盖或使用透气瓶盖进行培养;

  08 检查培养箱二氧化碳,温度和水盘。

  AR42J细胞培养注意事项

  1.AR42J细胞冻存后有一定复苏难度。因其生长非常慢,不易贴壁,从复苏到正常培养传代这个过程,通常需要10~14天,需要多一点耐心;

  2.复苏第2天可观察漂浮的细胞,状态是否良好。第4~5天有少量贴壁,且有密度依赖;

  3.细胞增殖过程中会产生少许细胞碎片和黑点,这属于正常现象,及时换液除去即可;每2~3天换液一次

  4.传代比例不宜过大,一般控制在1:2,每4~5天传代一次;

  5.传代时细胞较难消化成单颗,但只要消化为小且松散的细胞团(一般为2-5个细胞聚集)也不影响细胞生长;

  6.细胞聚集成团块生长,不会完全汇合,团块过大时(接种后团块扩大5~8倍,或细胞出现堆积)需及时传代,否则会成团漂浮;

  7.多聚赖氨酸包被有利于细胞贴壁,可使细胞分布更均匀。

细胞正常生长图

图1:细胞正常生长图

复苏第2天,细胞状态图

图2:复苏第2天,细胞状态图

细胞包被,培养两周状态图

图3:细胞包被,培养两周状态图


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