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影响DNA/RNA转染效率的6大因素

2022-04-02 10:15:16
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  DNA转染

  1.启动子的选择

  启动子的选择对于转染基因的有效表达是非常重要的。对于转染过程本身虽然无甚影响,但是对转染结果却有着微妙的影响。

  2.质粒的大小和质量

  线性化还是超螺旋会影响转染结果:超螺旋质粒的转染效率比线性DNA高得多,特别是瞬时转染。而线性化DNA转染的整合几率高。质粒太大了转染会困难一些。毕竟,相对致密、较小的外源异物被细胞内吞的几率要大一些。如果你的质粒正好比较大,又没有经验,选择特别注明可以转大质粒的转染试剂成功几率会高一些。有的转染试剂还会提供一些促进DNA凝聚的成分,使得DNA形成转染复合物时更致密一些,更容易转染一些。纯化质粒的质量也会影响转染效率,一定要选择高质量的质粒。

  3.质粒DNA的浓度和量

  既然质粒纯化已经不成问题,初学者通常都不会在乎甚至愿意多加点DNA,但是要注意的是,DNA量过少固然转染效率不高,DNA量过多同样会降低转染效率。所以预实验需要按照说明书的要求,按一定比例混合适量的质粒DNA和转染试剂。有的转染试剂要求DNA的量多些,有的转染试剂效率高只要很少DNA。

  RNA转染

  1.转染试剂

  转染中要额外注意的就是转染试剂应该是确认无RNase污染的,而且也尽量避免和质粒DNA转染混用—即使试剂本身兼容DNA和RNA转染,因RNA与DNA大小不同,转染条件不同,所需的试剂也应不同,所以RNA专用的转染试剂会更好一些。

  2.RNA转染时RNA的用量

  RNA转染的用量必须参考RNA转染试剂说明,因为RNA和转染试剂的比例决定了转染复合物的结构和净电荷,以及是否容易被细胞膜吸附和内吞。RNA少了固然表达不好,太多也会有毒性的问题。

  3.RNA本身的长度结构

  除了操作,RNA本身的长度结构也对转染有一定的影响。长度过长容易断链,哺乳动物的mRNA分子带有5’端帽子结构和3’端PolyA尾巴,此外还有成为IRES(internalribosomal entrysite)的核糖体结合区,这些结构或者有助于提高mRNA的稳定性,或者有助于核糖体结合到mRNA上进行翻译。


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