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传代后细胞不贴壁(细胞不贴壁是什么原因)

发布时间:2022-03-27 10:41:07 阅读:113032次 来源:普诺赛

  各类细胞产品是我们做实验研究的基础,一支小小的细胞,关乎我们各种实验的成功与否,细胞的”小事情“,在实验中都是”大事情“,如果你的细胞出现生长缓慢、不贴壁等情况,那你可要注意了,这就是细胞状态不好的信号,要及时“挽救”,不然很有可能细胞就濒临死亡。

图例

  问题一:细胞生长缓慢

  细胞长得慢是细胞培养过程中比较常见的问题,一般来说,细胞活力和浓度一直是细胞健康的标志,细胞长得慢的话,活力和浓度可能都会直线下降。

  造成细胞生长缓慢的主要原因及解决方法:

  1,新配置的培养基以及换了新的血清,细胞不适应;

  解决方法:最好使用最适宜的培养基,如果条件不允许,可以换液时不要全量换液逐渐增加新的培养基比例,1/4、1/2、3/4到1,多传代几次,让细胞慢慢适应。

  2,细胞密度不够

  有些细胞是细胞依赖性细胞,密度过低生长缓慢;也可能是细胞分泌促生长活性物质过少,细胞连接不好等原因。

  解决办法:增加细胞接种密度;将细胞从大皿转移至小皿培养;适当增加培养基血清浓度。

  3,培养环境改变

  细胞培养箱的温度、CO2、细胞的生存环境要适宜,一般来说最佳温度:是37 ℃, CO2:浓度为5% , pH:为7.2-7.4,还有渗透压等,大家要注意调好,不要随意改变。

  4,污染,如支原体,细菌,真菌等

  解决办法:细胞污染是多方面的原因,一方面要严格无菌操作技术、保持清洁的环境,另一方面,污染之后要及时鉴别和处理,并且,建议大家使用品质良好的细胞株和培养基,这是是减少污染的最好方法。

  5,细胞本身状态改变,如衰老等

  解决办法:没有可逆的办法,只能及时更换新的细胞。

  当然如果培养细胞是原代的话,生长速度是比较缓慢的,如果没有及时换液,营养成分不够,细胞也会生长缓慢。用螺旋口瓶培养细胞时,需将瓶盖微松,以保证通气,要保持培养箱内空气干净等。

  其实只要条件适于细胞生长,细胞在自己的“小房子”里面舒适自由,那么,它一定会长得很快,并且,形态越来越“漂亮”。

  问题二:细胞不贴壁

  一般来说,正常情况下,细胞培养一段时间后,正常生长的小细胞们贴在壁上,优哉游哉地享受生活,而没能存活的细胞和其他种类的细胞则可能悬浮在上,如果你的细胞不贴壁,极有可能是没有存活下来。

  细胞不贴壁可能原因及解决办法:

  1,胰酶消化过度;解决方法:适当缩短胰酶消化时间或降低胰酶浓度。

  2,支原体污染;解决方法:分离培养物,检测支原体。清洁支架和培养箱。如发现支原体污染,丢弃培养物。

  3,培养瓶瓶底不干净;解决方法:换用新的培养皿或者培养瓶。

  4,消化液或培养液配制错误、过期储存、储存不当;解决方法:重新配置消化液或培养液

  5,细胞老化;解决方法:同样,没有可逆的办法,只能及时更换新的细胞。

  6,接种细胞起始浓度太低或太高;解决方法:根据细胞特性接种适量的细胞。

  总之,养细胞需要耐心,要温柔,要不然她真的会给你颜色看哦。上文也提到了,使用品质良好的细胞株和培养基是减少污染的最好方法,同时也是保证细胞生长良好的前提。


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