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thp1细胞怎么诱导分化(人单核细胞白血病诱导成巨噬细胞)

2022-03-18 09:57:27
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  THP-1(人单核细胞白血病)来自一位急性单核细胞白血病患者的血液,在实验研究中,常常诱导其分化为巨噬细胞和泡沫细胞。下面为大家总结了分化类型及其具体实验操作。

  THP-1分化为巨噬细胞

  巨噬细胞是重要的免疫效应细胞,在固有免疫和适应性免疫应答中发挥重要作用。同时,它也是高度异质性的细胞,受局部微环境的影响,可活化为不同的类型,展现出不同的表型和功能。由于巨噬细胞在不同的组织环境和生理、病理条件下的异质性,巨噬细胞被分为两种主要类型:M1型巨噬细胞和M2型巨噬细胞。

  THP-1细胞通常用佛波酯(PMA)诱导分化为巨噬细胞,然后在PMA仍然存在的情况下:

  脂多糖(LPS)(100ng/mL)、IFN-γ(20ng/mL)培养48h,诱导其向M1极化;

  IL-4(20ng/mL)、IL-13(20ng/mL)培养48h,诱导其向M2极化;

  最后,在无刺激物和无PMA的情况下,用无血清RPMI-1640培养基重悬细胞,可保持72h。

巨噬细胞分化为M1和M2

图1. 巨噬细胞分化为M1和M2

  PMA诱导THP-1步骤:

  将处于对数生长期的THP-1细胞离心,用RPMI-1640培养基重悬;

  加入PMA,显微镜下细胞计数,调整THP-1细胞密度为5*10^5/mL;

  使PMA终浓度为100ng/mL,将细胞种入六孔板,每孔加入细胞2mL;

  48h后,显微镜下观察巨噬细胞构建成功。

  单核细胞THP-1用PMA诱导后,由悬浮式生长变成贴壁生长,由圆形变成不规则形态,体积进一步增大,细胞浆疏松,细胞核增大明显,可见大量明显细胞器,胞膜周围可见少量突起。

THP-1经PMA诱导分化为巨噬细胞

图2. THP-1经PMA诱导分化为巨噬细胞

  THP-1分化为泡沫细胞

  THP-1细胞诱导分化为巨噬细胞后,可以通过摄取大量脂质转变为泡沫细胞,这也是动脉粥样硬化产生的原因。

  将THP-1细胞经PMA诱导为巨噬细胞后,可用RPMI-1640培养基配制氧化修饰低密度脂蛋白OX-LDL,使其终浓度为80mg/L,加入六孔板中,每孔量为2mL,干预24h。

  油红O染色步骤:

  吸出各孔中培养基,PBS漂洗三次;

  4%多聚甲醛37℃固定30min;

  PBS漂洗两次,油红O(1mL/孔)37℃染色20-30min;

  60%异丙醇漂洗5s,最好不要超过10s;

  马上用PBS漂洗2-3次。

  单核细胞源性巨噬细胞用OX-LDL诱导24h后, 倒置显微镜下观察,巨噬细胞体积进一步增大,细胞膜突触形成明显,胞浆增加,疏松化,可见大量细胞器及吞噬的脂质小滴。油红O染色后,细胞浆内可见大量红染物质。

巨噬细胞经OX-LDL诱导后用油红O染色

图3. 巨噬细胞经OX-LDL诱导后用油红O染色


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