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如何检测细胞培养污染(细胞培养出现污染怎么处理)

2022-03-05 10:37:41
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  在组织培养工作中,寻找不需要的受污染培养瓶会产生许多问题,包括过去和当前实验的数据有效性问题。

  根据污染物的来源,您可以使用光学显微镜、革兰氏染色、等温扩增或 PCR 来检测细胞培养物污染。 虽然丢弃受污染的细胞培养瓶很有帮助,但实验室中有一些物品需要丢弃(例如正在进行的实验)或去污,包括培养箱和组织培养柜。

  为防止污染,实验室人员必须始终遵循无菌技术程序。但是,当确实发生污染时,本文还将介绍一些识别细胞培养污染物的方法。

  为什么尽量减少细胞培养中的污染很重要?

  细胞污染会导致各种问题。它不仅会影响一项技术是否有效,还会影响您的实验结果和结果。污染还可以引入许多可能无法解释的变量。

  因此,检测、处理和防止细胞培养中的污染至关重要,因为:

  受污染的培养物会影响细胞的生长、形态、生理和新陈代谢,因此在研究中使用这些细胞可能会导致对结果的有效性产生怀疑,并撤回已发表的工作。

  这些细胞可能会导致时间损失,因为有必要重复之前和正在进行的实验。

  污染还可能导致几乎呈指数级的金钱损失,尤其是培养基、烧瓶和血清的成本。

  一些微生物污染物可能对实验室人员造成潜在的健康危害,尤其是病毒污染物。

  细胞培养中有哪些不同类型的污染物?

  细胞培养中有两种污染物:化学污染物和生物污染物

  化学污染物通常来自设备、介质、水或血清。

  至于生物污染物,最常见的原因是细菌、真菌和酵母。通常,这些类型的污染是显而易见的,您可以直观地检测到这个问题。然而,另一种污染物来源,如病毒,则更难检测和处理。

  您如何识别细胞培养中的细菌和真菌污染?

  细菌和真菌是培养的动物细胞中常见的污染物,它们的存在可以通过观察以下这些变化来检测(Geraghty等人,2014 年):

  无抗生素培养基的浊度增加。换言之,介质的颜色变得混浊。

  pH 值的变化。例如,培养基会因细菌污染物而变为酸性,而真菌的存在会使培养基变为碱性。在含有酚红的培养基中,细菌更容易将培养基的颜色变为黄色。然而,当一些真菌污染细胞培养物时,培养基会变成粉红色。

  光镜下形状明显。例如,可能会观察到团块或萌芽的小物体被真菌污染,而移动与细胞系形状不同的小物体可能表明存在细菌污染。

  另一种检测细菌和真菌的方法是在特殊培养基中进行微生物培养。培养培养物后,使用革兰氏染色测试细菌细胞(Geraghty等人,2014 年)。要执行此方法,您需要准备一些溶液,包括结晶紫。

  如果您需要革兰氏染色方案,GoldBio 有一个非常有用的方案,您可以在这里找到:革兰氏染色方案。

  如何拯救受污染的细胞培养物?

  通常,您可以立即去除受污染的细胞培养物,并从您的冷冻原液中开始新的培养物。然而,如果你真的需要保留它,拯救它的一种方法是用一些抗生素处理它,并在单独的培养箱中培养培养瓶中的细胞。在污染物完全清除后,建立冷冻库存以备将来工作,将剩余的培养物培养一个月,然后重新测试。

  以下是一些常用于处理受污染细胞培养物的抗生素:

常用于处理受污染细胞培养物的抗生素

  如何检测细胞培养中的支原体

  支原体是一组通常污染细胞培养物的细菌,例如在人类细胞和其他哺乳动物细胞中。与其他微生物污染物类似,支原体污染会广泛影响细胞生理和新陈代谢(Nikfarjam & Farzaneh,2012)。

  有许多方法可用于检测细胞培养中的支原体,包括在选择性微生物生长培养基上分离、使用 Hoechst 33258 直接或间接 DNA 染色、PCR、巢式 PCR、ELISA、放射自显影和免疫染色。

  然而,检测支原体的一种有效方法是使用等温扩增法,例如 GoldBio 的试剂盒:certus QC-mycoplasma Detection Kit和certus QC-mycoADVANCED Detection Kit。使用这些试剂盒的优点是灵敏度高、简单、快速。

  如何在细胞培养中检测病毒污染?

  病毒污染很难在常规光学显微镜下观察到,但可以通过其他方法检测,例如电子显微镜、免疫组织化学和 ELISA 测定(Geraghty等人,2014 年)。此外,还可以使用特定引物进行 PCR 或 RT-PCR,以扩增目标病毒基因并识别污染物。

  为了获得有关污染可能原因的初步信息,使用电子显微镜进行测试有助于发现病毒颗粒的存在。稍后,使用其他方法进行进一步测试,例如免疫组织化学或免疫荧光测定,也有助于了解有关病毒株的更多信息。

  不幸的是,很难恢复被病毒污染的细胞系,因为没有治疗方法。因此,必须丢弃被污染的烧瓶,以防止其他细胞系的交叉污染。

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