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细胞因子流式测定-通过流式细胞术进行细胞内细胞因子染色

2022-02-28 10:24:07
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  细胞内细胞因子染色 (ICS) 是一种细胞因子分析方法,可提供有关在(抗原特异性)刺激 T 细胞和 B 细胞时产生的细胞因子类型的信息。

  例如,ICS 可以揭示在某些培养条件下诱导的 CD4 + T 辅助细胞的哪个亚型,并指示生物或化合物是否会在体外改变 T 细胞极化。ICS 不会查看培养中所有细胞产生的分泌细胞因子的总量(通常通过ELISA 或 CBA进行分析),而是为您提供有关每个单独细胞产生的细胞因子的信息。这允许您分析产生感兴趣的细胞因子的细胞比例,或允许量化产生多种细胞因子的细胞数量(即多功能率)。

  例如,这可以帮助揭示免疫调节疗法对免疫反应的极化、强度和特异性。

细胞因子流式测定

  总 PBMC 或细胞亚群从血液中分离出来,并在您感兴趣的刺激物(例如病原体特异性抗原)存在或不存在(免疫调节)化合物的情况下进行培养。然后可以通过流式细胞术评估细胞因子的产生。

  这种流式细胞仪方法特别适合与以下检测相结合:

  CD40L 上调测定

  增殖试验

  转录因子表达分析

  通过流式细胞仪检测细胞因子产生的示例

  抗 TNF-α 使 T 细胞向 IL-10 极化并远离 IFN-γ

抗 TNF-α 使 T 细胞向 IL-10 极化并远离 IFN-γ

  在抗 TNFa 或同种型对照存在的情况下,初始CD4 + T 细胞由耐受性 DC 启动 2 周。随后用 PMA 和离子霉素重新刺激 T 细胞,并对 IL-4、IL-10、IFN-γ 和 IL-17 进行细胞内染色(未显示编译数据)。显示了具有代表性的点图(左)和 14 个独立实验的组合结果(右)。通过重新刺激的致敏 T 细胞的细胞内染色确定产生 IL-4、IL-10 和 IFN-g 的 T 细胞的百分比。

  平均值 + n=14 平均值的标准误差。*p≤0.05,**p≤0.01,***p≤0.001。


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