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细胞毒性实验-ADC体外细胞毒性测定

发布时间:2022-02-22 10:25:52 阅读:13662次 来源:百度学术

  抗体-药物偶联物 (ADC) 的体外疗效是 ADC 开发项目中的一个重要参数。这是对 ADC 药物功效的首次定性评估,它为 ADC 改进提供了基线,并为下游工艺设计提供了指导。

  ADC是一类新型靶向药物,具有增强的靶向特异性和药效。新一代 ADC 受益于有效载荷效力、位点特异性偶联策略和创新化学接头的一系列改进。ADC 发挥出色的抗肿瘤功效,同时提高了正常组织的安全性。良好的 ADC体外和体内功效是任何 ADC 开发项目的主要关注点,因为它是临床前研究的最终目标和临床评估的前奏。

  在进行体内活性/效力评估之前,必须全面评估 ADC的体外功效,尤其是它们的细胞毒性。体外细胞毒性测定被广泛用于此目的。在这组测定中,针对表达靶向表面抗原的多种肿瘤细胞系测试了 ADC 毒性。ADC的体外功效通过细胞活力分析直接反映,其中通过各种有机染料评估 ADC 暴露后的活细胞总数。此外,细胞凋亡和细胞周期测定等其他测定也用于分析和确认ADC的亚细胞靶标和工作机制。最后但并非最不重要的一点是,在评估 ADC 时体外有效性,正常细胞也参与该测定,以评估所测试的 ADC 的体外安全性。

  我们使用以下工作流程进行各种分析,以全面评估您的 ADC 的体外细胞毒性:

ADC 体外 细胞毒性测定

  ADC体外细胞毒性测定的工作流程。在分析中,表达靶向抗原的癌细胞和正常细胞分别用于综合评估 ADC 的细胞毒性和安全性。

  细胞系培养——培养表达靶抗原的癌细胞和正常细胞用于 ADC 毒性分析。

  抗原表达验证——流式细胞术方法,如荧光激活细胞分选 (FACS) 测定,用于验证和量化目标抗原的表面表达,并评估 ADC 与抗原的结合。

  细胞毒性测定— ADC 细胞毒性使用以下方法评估

  细胞活力测定——用 Presto Blue、CCK-8 或其他试剂检测活细胞。

  细胞凋亡测量——通过膜联蛋白 V-FITC、碘化丙啶染色或其他试剂检测细胞凋亡。

  细胞周期分析——通过碘化丙啶染色或其他相应试剂检测细胞周期不同阶段的细胞。

  数据分析——从这些分析中收集的数据使用适当的软件包进行编译和分析。

ADC 体外 细胞毒性测定

  ADC体外细胞毒性分析。ADC的体外细胞毒性由来自细胞活力测定的 EC50 值反映(左),而 ADC 对微管组装的抑制作用通过荧光染色进行可视化(右,Mol Cancer Ther,2014)。

本文链接:https://www.zjby-biotech.com/news/hydt/850.html

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