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限制性片段长度多态性 (RFLP) 原理步骤

发布时间:2022-01-26 10:14:58 阅读:17312次 来源:百度学术

  限制性片段长度多态性 (RFLP) 是一种技术,其中可以通过分析源自其DNA切割的模式来区分生物体。

  这是一种利用同源 DNA 序列变异的技术。

  限制性片段长度多态性由与大小互不相同的限制性片段相关的替代等位基因的存在定义。简单地说,物种个体之间限制性 DNA 片段长度的变化称为 RFLP。

  识别这种限制性片段长度多态性的基本技术包括通过限制性内切酶将 DNA 样品片段化,这种内切酶可以识别和切割特定短序列出现的 DNA,这一过程称为限制性消化。

  然后通过称为琼脂糖凝胶电泳的过程将所得的 DNA 片段按长度分离,并通过 Southern 印迹程序转移到膜上。膜与标记的 DNA 探针的杂交然后确定与探针互补的片段的长度。

  当检测到的片段的长度因个体而异时,就会发生 RFLP。

  尽管由于廉价的 DNA 测序技术的兴起,现在基本上已经过时,但 RFLP 分析是第一个足够便宜的 DNA 分析技术,可以寻求广泛的应用。

限制性片段长度多态性 (RFLP)

  限制性片段长度多态性(RFLP)原理

  如果两种生物的特定限制性内切酶切割位点之间的距离不同,则当 DNA 用限制性内切酶消化时,产生的片段长度将不同。由此产生的模式的相似性和差异性可用于将物种(甚至菌株)彼此区分开来。

  限制性片段长度多态性 (RFLP) 涉及的步骤

限制性片段长度多态性 (RFLP) 涉及的步骤

  此过程的第一步是从目标中分离 DNA 。

  一旦从样品中分离出 DNA,就使用限制性内切酶对其进行限制性消化

  然后对消化后的 DNA 样品进行凝胶电泳,其中 DNA 根据其大小进行分离。产生了许多长度略有不同的 DNA 片段。

  然后将凝胶暴露于化学物质中,使双链 DNA 变性成为单链。

  随后进行Southern印迹,将DNA从凝胶转移到尼龙膜上。

  然后将尼龙膜暴露于带有放射性互补核苷酸探针的溶液中,该探针与尼龙膜上特定选择的 DNA 序列杂交。

  然后将膜放置在 X 射线胶片上,杂交的放射性探针使 X 射线胶片曝光,产生放射自显影图。

  进行 RFLP 分析以检测模式差异以确认多态性。

  限制性片段长度多态性 (RFLP) 的应用

  RFLP 分析以前是基因组作图、遗传疾病基因定位、确定疾病风险和亲子鉴定的重要工具。

  RFLP 可用于许多不同的设置以实现不同的目标:

  在亲子鉴定案件或刑事案件中确定 DNA 样本的来源。(即它具有取证应用程序)。

  确定个体的疾病状态。(例如它可以用于检测突变)

  测量重组率,这可以导致具有 RFLP 基因座之间距离的遗传图谱。

  在动物种群遗传多样性或繁殖模式的表征中。

  RFLP 已被开发用于人类、小鼠、玉米、番茄、水稻等的染色体作图。

  限制性片段长度多态性 (RFLP) 的优点

  与基于 PCR 的协议相比,RFLP 分析的主要优点是不需要先前的序列信息,也不需要寡核苷酸合成。

  结果基于可靠的基因型特征而不是表型。

  基于 RFLP 的遗传标记

  RFLP 是共显性标记,因此可以估计杂合性。

  RFLP & 是基因组 DNA 序列中非常有用的研究。

  高度稳健的方法,在实验室之间具有良好的可转移性。

  限制性片段长度多态性 (RFLP) 的局限性

  慢的

  繁琐

  需要大量的样本 DNA。

  无法实现自动化

  某些物种的低水平多态性

  每次测定检测到几个位点

  需要合适的探针库

  需要探针标记、DNA片段化、电泳、印迹、杂交、洗涤和放射自显影的组合过程。

本文链接:https://www.zjby-biotech.com/news/hydt/766.html

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