DNA ladder 是用于琼脂糖或丙烯酰胺凝胶电泳的不同长度 DNA 分子的溶液，可作为参考，根据其在电场中通过凝胶的迁移率来估计分离的未知 DNA 分子的大小。DNA 梯是每个 DNA 处理实验室常规使用的基本分子。

　　DNA 梯也称为分子量大小标记，因为它们有助于根据分子量区分不同的 DNA 片段，从而在大小方面区分它们。

　　它们已用于各种 DNA 相关程序，从区分 DNA 变体到量化 DNA 片段中的突变数量。

　　溴化乙锭等核染料可以很好地染色 DNA 梯形图，这样可以在凝胶电泳后观察 DNA 片段。

　　市售 DNA 梯形图有 50 bp、100 bp、1000 bp 和 3000 bp 形式。

　　这些梯子是通过限制性内切酶消化来自天然来源的已知长度的 DNA 片段而产生的。

　　因此，片段的长度取决于所使用的限制性内切酶，这使得该过程不完全可控。

　　为了克服这个缺点并使梯子更灵活，开发了 DNA 工程。

　　因此，出于商业目的，将包含由相同独特限制酶位点分隔的串联重复单元的 DNA 片段克隆到质粒中，然后部分消化以产生具有重复多聚体的梯子。

　　然而，最近，已经报道了许多描述通过采用聚合酶链式反应 (PCR)方法制备 DNA 梯的实验室协议。

　　该方法涉及使用引物组同时扩增 DNA 靶标或使用特定引物分别扩增不同 DNA 靶标。

　　用于电泳的 DNA 梯应具有以下特点：

　　梯子内的碎片应该可以相互分离。

　　单个片段的浓度应足以在电泳后可视化。

　　含有加载染料的梯不应影响 DNA 梯的特异性。

　　梯子中的碎片应该足够稳定，可以长期使用。

　　梯子应该是高度纯化的，避免不必要的和未知的片段。

DNA 梯形图（1kb、1kb plus、100 bp、100 bp plus）和用途

　　DNA梯的类型

　　根据要鉴定的 DNA 片段的长度或存在于梯中的片段数量，DNA 梯具有不同的类型。一些常见的 DNA 阶梯类型是：

　　1 kb DNA 阶梯

　　1 kb DNA ladder 由 13 个线性双链 DNA 片段组成，可用于确定 250 bp 至 10,000 bp 的 DNA 片段的大小。

　　1 kb DNA ladder 是用限制性内切酶和 PCR 产物消化的大量质粒的独特组合，可产生 13 个 DNA 片段，适合用作电泳的分子量标准。

　　使用高强度 1 kb DNA 梯有助于快速轻松地确定电泳结果。

　　描述

　　这些梯子具有 1000 bp 和 3000 bp 的参考带，便于定位。

　　1 kb 梯形图可以在商业上购买到各种浓度，但电泳运行的推荐上样量为 0.5 µg (5 µl)。

　　这些可用于琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶中，凝胶浓度为 0.75% 至 1%。

　　这些阶梯带有不同的示踪染料，如溴酚蓝、二甲苯青 FF。

　　将市售的梯子稀释成 1:4 的水溶液以供使用（1 份梯子需要 3 份水）。

　　将 75 µl 水与 25 µl DNA ladder 混合制成 100 µl 溶液。

　　然后，加入试剂盒中存在的 20 µl 上样染料，将溶液分成 60 µl 溶液（0.5 ml 微量离心管）并储存在 -20°C。

　　对于典型的小 (40 ml) 琼脂糖凝胶，每个泳道使用 3 µl 这种稀释的梯子，这导致每个泳道的梯子 DNA 浓度约为 0.63 µg。

　　1 Kb 分子量标准梯可以在不同温度下存储不同时间，例如 25ºC 下 6 个月，4ºC 下 12 个月和 -20ºC 下 24 个月，在 10 mM Tris-HCl 或 1 mM EDTA 等存储缓冲液中。

　　1 kb DNA 梯的用途

　　1 kb DNA 梯最重要和最突出的用途是确定长度为 250 bps 至 10,000 bps 的双链 DNA 片段的大小。

　　DNA 片段大小的测定允许对 DNA 片段及其相对大小进行量化。

　　这些 DNA 大小标准可用作电泳过程中的对照。

　　1 kb 加 DNA 梯

　　1 kb plus DNA ladder 是一种 DNA 大小标准，由长度范围为 0.5 kb 至 10 kb 的 DNA 片段组成，用于确定长度范围为 250 bp 至 25,000 bp 的双链 DNA 片段的大小。

　　1 kb plus DNA ladder 由 14 个单独的色谱纯化 DNA 片段组成。

　　纯化的 DNA 片段产生清晰清晰的条带，有助于识别过程。

　　描述

　　1 kb plus DNA ladder 通常有大约 14 个纯化的 DNA 片段，在 1000 和 3000 bp 处有一个参考带，以便于定位。

　　大多数 1 kb plus DNA ladders 都带有上样染料，可以方便地检测电泳后的尖锐条带。

　　在这些梯子中，DNA 的数量或 DNA 片段的数量是精确的。

　　1 kb plus DNA ladders 可用于 0.7 至 1% 的琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶。

　　使用 1 kb plus DNA ladder

　　1 kb plus DNA ladders 最重要的用途是测定 250 bp 至 25,000 bp 范围内的双链 DNA 的大小。

　　它有助于确定比通常片段长得多的 DNA 片段的大小，从而可以量化 DNA 片段及其彼此的相对大小。

　　100 bp DNA 阶梯

　　100 bp DNA ladder 是一种 DNA 大小标准，用于大小在 100 bp 至 1500 bp 范围内的双链 DNA 的大小和定量。

　　这些梯由大约 11 个高度纯化的 DNA 片段组成，这些片段形成单独的清晰条带，用于识别该范围内的其他 DNA 片段。

　　描述

　　这些梯子具有 500 bp 和 1500 bp 的参考带，便于定位。

　　梯子设计为具有均匀强度的不同大小的 DNA 条带，以便清晰地查看每个条带。

　　每个条带中都使用了精确数量的 DNA，可以对 DNA 样本进行近似定量。

　　其中一些梯子甚至可以用 T4 多核苷酸激酶或 T4 DNA 聚合酶进行放射性标记。

　　这种双链 DNA 梯可以在染色后在 1-2% 琼脂糖凝胶上可视化。

　　100 bp DNA 梯的用途

　　这些梯子可用于确定 100 bp 至 1500 bp 范围内的双链 DNA 片段的大小。

　　它还可用于诊断目的，例如病原体的分子检测和遗传变异性的表征。

　　此外，还可用于抗病基因的分子标记。

　　100 bp 加 DNA 梯

　　100 bp plus DNA ladder 是一种 DNA 大小标准，用于在琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶上测定和定量 100 bp 至 3,000 bp 范围内的双链 DNA。

　　梯子有大约 12 个纯化的 DNA 片段，它们形成单独的清晰条带，用于识别该范围内的其他 DNA 片段。

　　描述

　　这些梯子具有 500 bp 和 1500 bp 的参考带，便于定位。

　　这种双链梯可用于在 1-2% 凝胶中进行可视化。

　　梯形图内每个条带中确定数量的 DNA 可以对样本 DNA 进行近似量化。

　　梯子由双链 DNA 的 PCR 和限制性内切酶消化产生。

　　梯子带有上样染料和上样缓冲液，以使片段能够通过凝胶板移动。

　　使用 100 bp 加 DNA 梯

　　100 bp plus DNA ladder 可用作 DNA 大小标准，用于可视化大小为 100 bp 至 3,000 bp 的线性双标准 DNA 片段。

　　它可以根据 DNA 片段的分子量和大小来识别和分离样品。

　　该梯子与其他梯子一样，可用于诊断目的，以分子检测不同样品中的各种病原体。