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分子实验-免疫细胞化学方案(ICC 方案)

2022-01-12 10:39:18
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  标本制备

  1. 在室温下用聚-L-赖氨酸覆盖盖玻片 5 分钟。

  2. 吸出液体,让盖玻片完全干燥,然后在紫外光下消毒至少 30 分钟。

  3. 在玻璃盖玻片上培养细胞。注意:如果标本是悬浮细胞,则需要细胞离心涂片或涂片制备。

  免疫染色

  1. 用 PBS 冲洗盖玻片两次。

  2. 在室温下用 4% 多聚甲醛在 PBS 中固定细胞 15 分钟。

  注意:多聚甲醛有毒,只能在通风橱中使用。

  3. 吸出固定液,用 PBS 冲洗两次,每次 5 分钟。

  4. 用 PBS 中的 0.1-0.5% triton x-100 通透细胞 10 分钟。

  注意:仅当抗体需要进入细胞内部以检测蛋白质时才需要通透。这些包括表位在细胞质区域的细胞内蛋白和跨膜蛋白。

  5. 吸出 triton x-100,在 PBS 中冲洗两次,每次 5 分钟。

  6. 将细胞在 PBS 中的 10% 正常山羊血清中室温孵育 30 分钟。

  7. 吸出山羊血清,将切片与适当稀释的一抗在 PBS 中在 4°C 下孵育过夜或在 37°C 下孵育 1 小时。

  8. 在 PBS 中冲洗 3 次,每次 5 分钟。

  9. 在 PBS 中适当稀释的荧光染料偶联二抗在 37℃避光孵育细胞 1 小时。

  10. 在 PBS 中在黑暗中冲洗 3 次,每次 5 分钟。

  11. 用 1 μg/ml DAPI 孵育细胞。

  12. 用一滴封固剂封固盖玻片。

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