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分子实验-免疫组化临床意义(免疫组化染色操作步骤)

2021-12-20 10:43:43
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  从实验结果而言,免疫组化技术服务主要涉及抗体实验结果的描述与分析,图片的确定与选取,相关数据的提供,上述工作是免疫组化工作的重点内容,只有严格的实验设计,标准的实验操作,专业化的结果分析才能更好的满足客户的要求,这点对于形式为腹水,上清,培养液之类的抗体显得更为重要。关于上述服务内容应该在实验开始前由双方明确,一般而言,客户方实验前应提出需要什么样的结果与分析,例如是简要还是详细的描述实验结果,需要实验数据否,图片的数量与规格等。如果为双盲试验或有第三方参与,则事先申明。

  免疫组化临床意义

  近年来,随着免疫组织化学技术的发展和各种特异性抗体的出现,使许多疑难肿瘤得到了明确诊断。在常规肿瘤病理诊断中,5%-10%的病例单靠H.E.染色难以作出明确的形态学诊断。尤其是免疫组化在肿瘤诊断和鉴别诊断中的实用价值受到了普遍的认可,其在低分化或未分化肿瘤的鉴别诊断时,准确率可达50%-75%。

  免疫组织化学的临床应用主要包括以下几方面:

  ⑴恶性肿瘤的诊断与鉴别诊断;

  ⑵确定转移性恶性肿瘤的原发部位;

  ⑶对某类肿瘤进行进一步的病理分型;

  ⑷软组织肿瘤的治疗一般需根据正确的组织学分类,因其种类多、组织形态相像,有时难以区分其组织来源,应用多种标志进行免疫组化研究对软组织肿瘤的诊断是不可缺少的;

  ⑸发现微小转移灶,有助于临床治疗方案的确定,包括手术范围的确定。

  ⑹为临床提供治疗方案的选择。

实验室

  免疫组化化染色操作步骤

  ⑴、石蜡切片脱蜡至水。

  ⑵、 3%H 2 O2 室温孵育 5-10 分钟,以消除内源性过氧化物酶的活性。

  ⑶、蒸馏水冲洗, PBS 浸泡 5 分钟 x2 (如需抗原修复,可在此步后进行)。

  ⑷、 5-10% 正常山羊血清(PBS 稀释)封闭,室温孵育 10 分钟,倾去血清,勿洗。滴加 一抗 工作液, 37 ℃ 孵育 1-2 小时或 4 ℃ 过夜。

  ⑸、 PBS 冲洗, 5 分钟 x3 次。

  ⑹、滴加适量 生物素标记二抗 工作液, 37 ℃ 孵育 10-30 分钟。

  ⑺、 PBS 冲洗, 5 分钟 x3 次。

  ⑻、滴加适量的 辣根酶或碱性磷酸酶标记的链霉卵白素 工作液, 37 ℃ 孵育 10-30 分钟。

  ⑼、 PBS 冲洗, 5 分钟 x3 次。

  ⑽、显色剂显色 3-15 分钟(DAB 或 NBT/BCIP)

  ⑾、自来水充分冲洗,复染,脱水,透明,封片。

  化染色步骤

  冰冻切片 4-8μm ,室温放置 30 分钟后,入 4 ℃丙酮固定 10分钟,PBS洗,5分钟x3,用过氧化氢孵育5-10分钟,消除内源性过氧化物酶的活性。

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