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细胞实验:核酸的提取方法「dna及rna提取」

发布时间:2021-10-15 04:32:01 阅读:15132次 来源:本站

  核酸是由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物,是生命最基本的物质之一。核酸存在于所有动物细胞、植物细胞、微生物内、生物体内的核酸常与蛋白质结合形成核蛋白。不同的核酸的化学组成、核苷酸排列顺序都不同。核酸主要包括RNA(核糖核酸)和DNA(脱氧核糖核酸),其中DNA是储存、复制和传递遗传信息的主要物质基础。

  核酸提取的原则首先保证核算一级结构的完整性,其次要排除其它分子的污染。

  提取核酸时要注意简化步骤,缩短提取时间;减少化学因素对核酸的降解;减少物理因素对核酸的降解:机械剪切力和高温;防止核酸的生物降解。

  核酸提取大致分为3大部分:破碎、提取、纯化

  细胞裂解法

  1.物理方式:煮沸法、玻璃珠法、超声波法、研磨法、冻融法、匀浆法

  2.化学方式:表面活性剂(SDS法)、碱裂解法

  3.生物方式:酶法(溶菌酶、蛋白酶K等)

细胞实验

  常见样本提取方法总结

  浓盐法:利用RNA和DNA在盐溶液中溶解度不同,将二者分离

  有机溶剂提取法:有机溶剂作为蛋白变性剂,同时抑制核酸酶的降解作用

  高度梯度离心法:利用不同内容物密度不同的原理分离各种内容物

  吸附材料结合法:①硅质材料 高盐低PH值结合核酸,低盐高PH值洗脱②阴离子交换树脂 低盐高PH值结合核酸,高盐低PH值洗脱③磁珠  磁珠微粒包裹上不同基因可吸附不同的目的物,从而达到分离目的

  胍盐提取结合二氧化硅吸附法

  二氧化硅具有特异吸附核酸的特性,异硫氰酸胍可使细胞裂解,因此在高浓度异硫氰酸胍存在下,从细胞包括细菌或者病毒颗粒中释放出来的核酸成分可以结合在二氧化硅上,利用此特性可提取血液和尿液中的DNA和RNA

  TRlzol试剂提取RNA

  用TRlzol试剂裂解细胞,再加入氯仿,离心后可见三层,上层为透明的水相含有RNA,中间含有DNA,下层为红色的有机相,含蛋白质。

  离心柱提取

  离心柱技术是用于微量核酸分离纯化的较为简单的方法,属于硅吸附方法的一种,在原理上可分为三个部分:

  ①利用裂解液促使细胞破碎,使细胞中的核酸释放出来。

  ②把释放出来的核酸特异吸附在特定的硅载体上,这种载体只对核酸有较强的亲和力和吸附力,对其他生化成分如蛋白质、多糖、脂类则基本不吸附,因而离心时被甩出柱子。

  ③把吸附在特异载体上的核酸用洗脱液洗脱下来,分离得到纯化的核酸。

  磁珠法

  依据与硅胶膜离心柱相同的原理,运用纳米技术对超顺磁性纳米颗粒的表面进行改良和表面修饰后,制备成超顺磁性氧化硅纳米磁珠。该磁珠能在微观界面上与核酸分子特异性地识别和高效结合。利用氧化硅纳米微球的超顺磁性,在Chaotropic盐(盐酸胍、异硫氰酸胍等)和外加磁场的作用下,能从血液、动物组织、食品、病原微生物等样本中的DNA和RNA分离出来,可应用于临床疾病诊断、输血安全、法医学鉴定、环境微生物检测、食品安全检测、分子生物学研究等多

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