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细胞培养实验中,怎么把细胞培养好

发布时间:2022-07-21 10:33:23 阅读:13622次 来源:百度学术

  一提到细胞培养,这是多少实验者的噩梦,简直……说多了都是泪。

  小编经过软磨硬泡终于从师兄师姐那里讨到了细胞培养秘籍,今天就大方一回,分享给大家。

   血清与培养基的选择

  一般实验血清的添加比例为10%,也可根据细胞状态和生长速率适当增加或减少添加比例。

  对于培养基,建议选择商品化的,比较成熟,稳定性也较好。

   培养瓶的选择

  目前商品化的细胞培养瓶主要为瓶盖是否带气孔两种。其中不带透气孔细胞培养瓶拧紧后需适当回旋瓶盖,保证CO2能顺利进入细胞培养瓶。

  细胞培养过程中,对于适应能力强的肿瘤细胞,可在传代3-4次后更换新的细胞培养瓶。对于非肿瘤细胞系如293T等细胞,建议每次传代更换新的细胞培养瓶来保证细胞状态。

   细胞传代

  传代时通常使用胰酶消化法。该方法又分为干消化法和湿消化法。

  ▶ 湿消化法:待细胞变圆,成流沙状脱落时即可加入新鲜培养基终止消化,1000rpm离心5min,弃去上清,用新鲜培养基重悬传代。

  ▶ 干消化法:胰酶浸润后弃去胰酶,待细胞变圆后加入新鲜培养基吹下后再进行细胞传代。

  不同细胞的细胞间连接强度不一样,消化时间不同;不同细胞的贴壁能力不同,消化时间不同;消化时应观察细胞形态,避免因过度消化影响细胞活性。

   细胞冻存与复苏

  当细胞生长状况较好或者代数较早时,需及时大量的冻存。

  细胞冻存密度通常为1-3×106个/ml。通常4℃放置0.5h,-20℃放置2h,-80℃冰箱中过夜,取出冻存管,移入液氮容器内。

  细胞复苏38℃水浴不时摇动,在1分钟内使其完全融化,1000rpm离心5min,弃去上清,用新鲜培养基重悬移入培养瓶中。

   污染防控

  细胞培养最基本的是做好污染防控,包括微生物污染的防控和细胞系间交叉污染的防控。

  实验中需保持良好的操作习惯,所用材料的位置摆放要顺手,污染源和已灭菌物品要分开放置。实验室也需定期清洁与消毒。

本文链接:https://www.zjby-biotech.com/news/hydt/1393.html

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