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Elisa技术概况(elisa实验是什么实验)

2022-04-16 10:31:42
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Elisa技术概况(elisa实验是什么实验)

  1、起源

  1971年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附测定用于IgG定量测定的文章,使得1966年用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。

  2、定义

  酶联免疫吸附测定(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA)是指将可溶性的抗原或抗体结合到固相载体上,利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法。

  3、作用

  ELISA是蛋白定量的金标准,也是免疫学研究中最常用的实验方法之一。

  (1)免疫酶染色各种细胞内成份的定位;

  (2)研究抗酶抗体的合成;

  (3)显现微量的免疫沉淀反应;

  (4)定量检测体液中抗原或抗体成份。

  4、优点

  快速、灵敏、定性、定量、定位

  5、原理

  ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。进行检测时,样品中的受检物质(抗原或抗体)与固定的抗体或抗原结合。通过洗板除去非结合物,再加入酶标记的抗原或抗体,此时,能固定下来的酶量与样品中被检物质的量相关。通过加入与酶反应的底物后显色,根据颜色的深浅可以判断样品中物质的含量,进行定性或定量的分析。由于酶的催化效率很高,间接地放大了免疫反应的结果,使测定方法达到很高的灵敏度。

  6、检测方法

  双抗体夹心法测抗原

  针对抗原分子上两个不同抗原决定簇的单克隆抗体分别作为固相抗体和酶标抗体。适用于测定二价或二价以上的大分子抗原,不适用于测定半抗原及小分子单价抗原,因其不能形成两位点夹心。

图例

  竞争法测抗原

  首先将特异性抗体包被于固相载体表面,经洗涤后分成两组:一组加酶标记抗原和被测抗原的混合液,另一组只加酶标记抗原,经孵育洗涤后加底物显色,这两组底物降解量之差,即为所要测定的未知抗原的量。此方法测定的抗原只要有一个结合部位即可,对小分子抗原如激素和药物类的测定常用此法。优点是快,缺点是需要较多量的酶标记抗原。

图例

  免疫抑制法测抗原

  被检标本对底物显色的抑制程度与标本中所含抗原的量成正比,二者之差即为预测抗原的量。

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  间接法测抗体

  是检测抗体最常用的方法,原理为利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体。本法只要更换不同的固相抗原,可以用一种酶标抗体检测各种与抗原相应的抗体。主要用于对病原体的检测而进行传染病的诊断。

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