Native PAGE可用于从生物膜和总细胞和组织匀浆中一步分离蛋白质复合物。它还可用于确定天然蛋白质质量和寡聚状态，并确定生理蛋白质-蛋白质相互作用。天然复合物通过电洗脱或扩散从凝胶中回收，用于二维结晶和电子显微镜检查，或通过凝胶内活性测定或天然电印迹和免疫检测进行分析。

　　原理

　　Native PAGE使用与SDS-PAGE相同的不连续氯离子和甘氨酸离子前沿来形成移动边界，这些边界堆叠然后通过荷质比分离多肽。蛋白质在非还原非变性样品缓冲液中制备，该缓冲液保持蛋白质的二级结构和天然电荷密度。因此，如果目标蛋白在您的样品中具有聚合形式，可以轻松地从native PAGE凝胶的camshot中看到多个条带。在非变性PAGE电泳中，大多数蛋白质具有酸性或微碱性pl（等电点）（~3-8）并向负极迁移。例如，如果蛋白质pl大于8,9，可能应该反转阳极并运行native PAGE凝胶。

　　相关试剂配制

　　Buffers:

　　For a 5ml native PAGE stacking gel

　　*: 在每次使用前添加。

　　For a 10ml native PAGE separating gel:

　　*: 在每次使用前添加。

　　Sample buffer (2x):

　　Running Buffer:

　　注意：运行缓冲液应为~ pH 8.3。不要调节 pH 值。

　　凝胶电泳方案

　　1.  在小烧杯中准备适量的分离胶，然后加入特定体积的分离胶。AP 和 TEMED 并轻轻旋转烧杯以确保充分混合。将凝胶溶液移入凝胶浇注的玻璃板之间的间隙中（不要完全填充）。用水填充剩余空间（或者异丙醇）。20-30 分钟完全凝胶化。

　　2.  在分离胶凝胶化的同时制备浓缩胶溶液。在烧杯中准备适量的浓缩胶，并与 10% AP 和 1% TEMED 混合。将第一步中的水倒出，将浓缩凝胶溶液移入间隙并插入梳子。20-30分钟让它凝胶化。

　　3.  将样品与样品缓冲液混合。不要加热样品！

　　4.  加载样品混合物并设置适当的电压以运行电泳。注意：最好将系统放在冰上，不要设置相对较高的电压，以防蛋白质降解。

　　5.  像标准考马斯蓝方案一样染色或进行免疫印迹程序（蛋白质印迹）。

　　注意事项

　　1. 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的过程中，蛋白质的迁移率不仅和蛋白质的等电点有关，还和蛋白质的分子量以及分子形状有关，其中蛋白质的等电点是最重要的影响因子，要根据蛋白质的等电点来选择对应的电泳缓冲系统；

　　2. 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的过程中，要注意电压过高引起发热而导致蛋白质变性，所以最好在电泳槽外面放置冰块以降低温度；

　　3.  蛋白质的分子量较大，则电泳时间可以适当延长，以使目的蛋白质有足够的迁移率和其它的蛋白质分开，反之亦然;

　　4.  变性样品的离子强度不能太高（I<0.1mM）。调整样品的PH在4.0左右，这对于能否做好非变性样品非常重要。上样BUFFER 中没有SDS之外，加入样品后不能加热。