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AB-PAS染色实验操作步骤(手把手教你做AB-PAS染色)

2023-04-12 10:36:51
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  PAS染色法(Periodic Acid-Schiff stain)在组织学上主要用来检测组织中的糖类,也称为糖原染色。原理为过碘酸把糖类相邻两个碳上的羟基氧化成醛基,Schiff试剂可以和醛基反应使检体呈现紫红色。

  实验步骤

  1、脱蜡至水

  二甲苯Ⅰ15min,二甲苯Ⅱ15min,无水乙醇5min,90%乙醇3min,80%乙醇3min,70%乙醇3min。蒸馏水3min,重复3次,PBS缓冲液3min,重复3次。

  2、阿利新蓝染色液染色

  使用阿利新蓝染色液对组织进行滴染或者浸染10-20min。用蒸馏水洗3min,重复3次。

  3、氧化剂氧化

  使用氧化剂对组织进行氧化5min。用自来水简单冲洗后,用蒸馏水重复洗2次,每次3min。

  4、Schiff Reagent侵染

  将组织放入Schiff Reagent染液中浸染10-20min(也可采用滴染),浸染结束后用流水冲洗10min。

  5、复染细胞核

  苏木素复染2min,细胞核变蓝色即可终止,自来水冲洗3min。

  6、分化

  酸性分化液分化2-5s,自来水冲洗3min。

  7、返蓝

  用Scott蓝化液进行返蓝1-2min,返蓝结束后用流水冲洗3min。

  8、脱水

  70%乙醇1min,80%乙醇1min,95%乙醇2min,100%乙醇4min。

  9、封片

  晾干片子,滴加适量中性树胶封片,盖上盖玻片。


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