PCR实验PCR（Polymerase Chain Reaction）即聚合酶链式反应，是指在DNA聚合酶催化下，以母链DNA为模板，以特定引物为延伸起点，通过变性、退火、延伸等步骤，体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程。是一项DNA体外合成放大技术，能快速特异地在体外扩增任何目的DNA。可用于基因分离克隆，序列分析，基因表达调控，基因多态性研究等许多方面。

　　PCR技术的基本原理

　　一.PCR反应成分：

　　1.模板DNA；2.引物；3.四种脱氧核糖核苷酸；

　　4.DNA聚合酶；5.反应缓冲液、Mg2 等。

　　二.PCR反应基本步骤：

　　1.变性：高温使双链DNA解离形成单链（94℃，30s）。

　　2.退火：低温下，引物与模板DNA互补区结合（55℃，30s）。

　　3.延伸：中温延伸。DNA聚合酶催化以引物为起始点的DNA链延伸反应（70～72℃，30～60s）

　　1.变性(denaturation)：通过加热使模板DNA的双链之间的氢键断裂，双链分开而成单链的过程。

　　2.退火(annealling)：当温度降低时，引物与模板DNA中互补区域结合成杂交分子。

　　3.延伸(extension)：在DNA聚合酶、dNTPs、 Mg2 存在下，DNA聚合酶催化引物按5’→3’方向延伸，合成出与模板DNA链互补的DNA子链。

　　以上述三个步骤为一个循环，每一循环的产物均可作为下一个循环的模板，经过n次循环后，目的DNA以2n的形式增加。

　　PCR实验中注意事项：

　　1)所用的所有溶液都应该没有核酸和(或)核酸酶(DNase和RNase)污染。

　　2)所有PCR试剂中使用的水都应该是高质量的-新鲜蒸馏的去离子水，用0.22μm过滤的，并且是高压灭菌。

　　3)在20℃到25℃贮存的试剂建议加点像叠氮钠一类的抗微生物剂，在扩增试剂或样品制备试剂中加入0.025%的叠氮钠不抑制扩增反应。

　　4)所用试剂都应该以大体积配制，实验一下看试剂是否满意，然后分装成仅够一次使用的量进行贮存。

　　5)所有试剂和样品准备过程中都要使用一次性灭菌的瓶子和管子。

　　6)新配制的试剂在用于准备新的标本之前应该加以检验。

　　7)样品准备和前PCR区所使用的移液管在不使用时都应该小心保存。

　　荧光定量 PCR 中的一些术语

　　CT值：荧光信号有统计意义显著增长(即穿过阈值线)时的循环次数，或者说是从基线到指数增长的拐点所对应的循环次数。

　　阈值：阈值的默认设置是 3-15 个循环的荧光信号的标准偏差的 10 倍。

　　CT值与起始模板的量成线性关系。